人神經(jīng)調(diào)節(jié)素2(NRG2)ELISA試劑盒
簡介
神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2(NRG2)是一種蛋白質(zhì)，由NRG2基因編碼。它是神經(jīng)元蛋白家族生長和分化因子中的一個新成員。通過與ErbB家族受體的相互作用，它能誘導上皮細胞、神經(jīng)元、膠質(zhì)細胞和其他類型的細胞的生長和分化，該基因由12個外顯子組成，其基因組結構與神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白家族配體的另一成員--神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1（NRG1）相似。NRG1和NRG2通過作用于組織中的不同部位并在細胞中引起不同的生物反應來介導不同的生物過程。該基因位于脫髓鞘夏科-瑪麗-托斯病基因座附近，但不對這種疾病負責。編碼不同異構體的替代轉(zhuǎn)錄本已被描述。
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術 : 將捕獲抗體包被于酶標板上，捕獲樣品及標準品中的待測物NRG2，清洗后，再加入標記的檢測抗體進行孵育后清洗，形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體"免疫復合物，隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過氧化物酶進行孵育，待孵育結束后清洗，接著加入TMB顯色后，若樣本中有待測物則顯藍色，加入終止液停止反應。檢測過程中游離的成分均被洗去，用酶標儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測物的含量呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣本NRG2的濃度。
需要的其他材料
1. 酶標儀，包含450nm測定波長，同時包含600-680nm校正波長更佳；
2. 移液器及槍頭；
3. 蒸餾水或去離子水；
4. 100-1000 mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機；
6. 水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度；
7. 用于稀釋標準品和樣品的試管。
樣品保存
樣品收集后若在 1 周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個月內(nèi)檢測），或-80℃（6個月內(nèi)檢測），避免反復凍融，標本溶血會影響檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
試劑準備工作
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液（20×）有晶體析出，需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋（例如：1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水）
標準品配置
試劑盒中取出標準品，準備7個試管，先從240ng/mL標準品（200μL）按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至12ng/mL（例：50μL的標準品母液+950μL的1×稀釋液，制備得到1000μL的12ng/mL濃度標準品），隨后在6個試管中分別加入500μL的1×稀釋液，在這6個單獨的試管中將12ng/mL標準品依次2倍倍比稀釋至6個梯度，共配制7個濃度的標準品，依次為：12ng/mL、6ng/mL、3ng/mL、1.5ng/mL、0.75ng/mL、0.375ng/mL、0.188ng/mL，從高濃度標準品溶液中吸取500μL標準品到下一個試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進行標準品的倍比稀釋（如圖所示），1×稀釋液用作零濃度標準品(0ng/mL)。

抗體工作液配置
使用十分鐘前，將100×檢測化抗體于1000×g離心1分鐘，隨后用1×稀釋液將100×檢測化抗體稀釋成1×檢測化抗體工作液，根據(jù)所需用量當日配置當日使用。
酶結合物工作液配置
使用十分鐘前，將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘，隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液，根據(jù)所需用量配置。

備 注：如待測樣本NRG2濃度高于標準品高值，請根據(jù)實際情況選擇適當?shù)南♂尡稊?shù)。

人神經(jīng)調(diào)節(jié)素2(NRG2)ELISA試劑盒
結果的計算    

計算標準品和樣本復孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標準曲線(作圖時去掉空白組的值)?；蛘呤褂媚軌蛏伤膮?shù)邏輯（4-P）曲線擬合的計算機軟件來創(chuàng)建標準曲線。若樣品OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應的稀釋倍數(shù)。示例數(shù)據(jù)以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實驗者需根據(jù)自己的實驗數(shù)據(jù)建立標準曲線。

本圖所示標準曲線僅供示例，結果計算應以同次試驗標準品所繪標準曲線為準計算樣本結果。

重復性
板內(nèi)變異系數(shù)小于10%，板間變異系數(shù)小于10%。

靈敏度
經(jīng)樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度為0.09ng/mL。
特異性

該試劑盒測定可識別重組人NRG2。

其他相關蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL，并測定交叉反應性。沒有觀察到明顯的交叉反應。

人神經(jīng)調(diào)節(jié)素2(NRG2)試劑盒僅供科研使用，用于定量檢測細胞培養(yǎng)上清、血清、血漿中的人NRG2的含量。