重要提示
采用EnvirusTM-AdV增強(qiáng)后，感染時(shí)的細(xì)胞融合度對(duì)感染效果有影響，建議細(xì)胞融合度在30-50%左右時(shí)進(jìn)行感染實(shí)驗(yàn)。確定了細(xì)胞量以后，建議采用倍比稀釋的方法，用不同量的腺病毒（MOI值：1－1000pfu/cell）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以確定的腺病毒用量。EnvirusTM-AdV和病毒的稀釋液采用和細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基一致的無(wú)血清液體，如無(wú)血清DMEM或1640。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程（以24孔板感染為例）
提前一天將細(xì)胞種植在24孔板中，以感染時(shí)細(xì)胞融合度在30-50%左右為宜(懸浮細(xì)胞根據(jù)需要調(diào)整，不要采用過(guò)高的細(xì)胞密度)。將4ul的EnvirusTM-AdV用25μl無(wú)血清稀釋液稀釋，充分混勻，制成EnvirusTM-AdV稀釋液。4℃靜置5分鐘。將適量病毒原液或稀釋液與EnvirusTM-AdV稀釋液輕柔混勻，4℃靜置15分鐘。
注：如采用病毒原液直接混合出現(xiàn)沉淀，建議用與⑴等量同樣的無(wú)血清稀釋液稀釋病毒。
將上述混合液加入到含*培養(yǎng)基的細(xì)胞上，37℃培養(yǎng)8小時(shí)后觀察細(xì)胞狀態(tài)，如沒(méi)有明顯變化，不要更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。由于腺病毒感染較快，可分別在12，24，48小時(shí)觀察表達(dá)情況。
注：適當(dāng)減少感染時(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)基量可以增加感染效率，但也可能增加細(xì)胞毒性。如出現(xiàn)細(xì)胞毒性可增加培養(yǎng)基量或更換培養(yǎng)基。
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